Lancet ：AAV、LNP递送单碱基编辑器修复肝脏不育，且不产生脱靶效应

向来，性状性哮喘一直是煎熬进化的难题，无论是生活中的较为相似的红绿色盲，还是煎熬欧洲皇室数个世纪的血友病，这些因性状缺陷而引发的哮喘不仅对患者的生活引发影响，还危害着患者的生命安均，愈来愈关键的是，进化已发现数千种性状性哮喘，但对其中的的绝大多数仍不知所措。

值得庆幸的是，性状物质学的没落使得进化力图知觉基因突变的单纯——是从基因本身的甲基化。基于此，如果我们尽可能对这些甲基化的基因肽链来进行简单的总编辑，使其替换成正确的双链对，那就可以某种程度彻底治愈这些进化基因突变。

基于CRISPR管理系统的双链图形化就是一项十分有渴望的、可用于基因突变治疗法的解决方案。但遗憾的是，一些科学研究说明了，双链图形化具有脱靶effect，就会对正常基因肽链来进行非抑制剂的总编辑。如果不能应付这一疑问，双链图形化在进化基因突变治疗法中的的系统设计将遥遥无期。

2021年1月25日，瑞士苏黎世联邦伯克利、苏黎世的大学以及巴塞尔的大学等都是由的联合小第三组在 Nature Biomedical Engineering 杂志上公开发表了题为：In vivo cytidine base editing of hepatocytes without detectable off-target mutations in RNA and DNA 的科学研究论文。

这项科学研究通过黏液就其病毒（AAV）和钙石墨烯微粒（LNP）两种邮寄适配，分别向大鼠肝邮寄双链双链图形化（CBE），并对其来进行均核糖体第三组和均性状物质脱靶词句的无偏倚分析。

科学研究人员发现，通过这两种适配邮寄的双链双链图形化可以整修致病甲基化，而不会在肝蛋白的RNA和DNA中的产生脱靶甲基化。这一结果支持了双链双链总编辑治疗法性状性肝哮喘的有待。

据统计，单双链甲基化分之一均部已发现的进化性状哮喘的将近2/3，同时也是许多动植物关键性状变异的性状基础。因此，联合开发一种简单且尽可能低效做到单双链替换的技术就显得尤为关键，新加坡人科学家刘如谦（Did Liu）指派的科学研究小第三组联合开发的双链图形化就是为此而生。

双链双链图形化（CBE）正是刘如谦研究所联合开发的一种双链图形化，它可以做到C？G双链对至T？A双链对的单独替换。

然而，早先的一些科学研究却说明了双链双链图形化（CBE）可以在蛋白系中的引发非抑制剂的均核糖体第三组脱靶甲基化，并在可借的多能干蛋白和两蛋白期胚胎中的引发数百个均性状物质脱靶甲基化。此外，双链双链图形化（CBE）中的所适用的脱氨酶——rAPOBEC1，其在体液的过暗示将可能引发大鼠肝发育不良和肝蛋白癌。

由此看来，指标双链双链图形化（CBE）等双链图形化的脱靶effect以及其他不良effect是十分必要的。

在这项科学研究中的，为了指标双链双链图形化（CBE）在体液究竟存在脱靶effect，科学研究小第三组重点科学研究了Pahenu2尿大鼠模型，并将SaKKH-CBE3双链总编辑管理系统通过AVV细胞内邮寄到大鼠肝中的。紧接着，科学研究小第三组适用RNA脱氧核糖核酸（RNA-Seq）对从大鼠肝中的提取的RNA来进行分析。

AVV细胞内的SaKKH-CBE3管理系统的Pahenu2大鼠肝邮寄和脱靶effect指标分析

科学研究人员推论到23%的索科利夫卡总编辑，但与MLT-的样本相比，核糖体第三组范围内的C→U的演变并都未增加。愈来愈有趣的是，当转染对乙酰氨基酚的SaKKH-CBE3 mRNA时，虽然与质粒转染相比，双链双链图形化（CBE）暗示减少了18倍，但在保留63%的目的总编辑的同时，还大大减少了非索科利夫卡甲基化。

这一结果说明了双链双链图形化（CBE）的过暗示可能与低的非索科利夫卡总编辑率密切就其。

CBE的过暗示可能与低的非索科利夫卡总编辑率密切就其

与此同时，科学研究小第三组还指标了AAV细胞内的SaKKH-CBE3管理系统在进到Pahenu2大鼠之后究竟会引发性状物质DNA的非索科利夫卡总编辑。均性状物质脱氧核糖核酸（S）分析说明了，SaKKH-CBE3管理系统都未在大鼠肝中的引入突出的DNA脱靶甲基化。

SaKKH-CBE3管理系统可以做到索科利夫卡总编辑总编辑，且未引发突出的RNA和DNA非索科利夫卡甲基化

除此之外，科学研究小第三组还通过钙石墨烯微粒（LNP）邮寄SaKKH-CBE3 mRNA和就其的sgRNA。他们的科学研究结果说明了，在钙石墨烯微粒（LNP）邮寄的瞬时暗示SaKKH-CBE3管理系统之后，可引发约21%的抑制剂总编辑并逆转了Pahenu2大鼠的哮喘遗传，同时也都未检测到均核糖体第三组和均性状物质的脱靶总编辑。

钙石墨烯微粒（LNP）邮寄的总编辑生产成本和安均性结果，不输于黏液就其病毒（AAV）适配。

通过钙石墨烯微粒(LNP)向大鼠肝中的邮寄SaKKH-CBE3管理系统

综上所述，SaKKH-CBE3管理系统在AAV或LNP细胞内的肝邮寄后的暗示不仅能有生产成本替换索科利夫卡甲基化、逆转Pahenu2大鼠的哮喘遗传，还不会对肝蛋白中的的RNA和DNA引发更进一步的非抑制剂总编辑。这一发现支持了双链双链图形化（CBE）在治疗法性状性肝哮喘的有待！

原始出处：

Chaolin Huang 1, Lixue Huang 2, Yeming Wang 3,et al.6-month consequences of COVID-19 in patients discharged from hospital: a cohort study.Lancet. 2021 Jan 16;397(10270):220-232. doi: 10.1016/S0140-6736(20)32656-8. Epub 2021 Jan 8.